Leishla Marie’s Bioblog

Nuestro proyecto de investigación durante este semestre se condujo con los siguientes objetivos: primero, en la obtención de una proteína recombinada por medio de cultivos bacterianos a gran escala, realizándose éstos en un biorreactor. Luego, se utilizarían técnicas de extracción y purificación de hemoproteínas para retener la proteína deseada y por último, la preparación de electrodos modificados con la proteína purificada para evaluar su comportamiento electroquímico utilizando la técnica de voltametría cíclica.

La preparación de los electrodos fue realizada con un electrodo de relleno completando el espacio con Hb I, Buffer fosfato pH = 6.5 y Sol-gels. El Sol-gel es el material que se utilizó para pegar la hemoproteína al electrodo. Para obtener resultados, lo que hemos hecho es caracterizar el electrodo modificado con la técnica de voltametría cíclica, es decir, que la hemoglobina responda bien y que esté estable en el electrodo, (que no se modifique con tantos cambios de potencial).

Primero, probamos si el cambio en potencial afectaba la hemoproteína, obtuvimos diferentes voltamogramas a diversas velocidades de barrido (desde 50 a 1000 mVs^-1). Verificando la data se realizó una gráfica del comportamiento lineal entre las intensidades de picos catódicos y anódicos con respecto a las velocidades de barrido. Se obtuvo una regresión lineal que demuestra que la hemoglobina está en buen estado y se mantiene estable en el sol-gel.

Otro aspecto que se investigó es el efecto del pH sobre las voltametrías. Se realizaron una serie de buffer de pH=4.5 hasta pH=9. Cada voltametrías fue hecha con un buffer distinto y se compararon dejándonos por el comportamiento en el pico catódico.  El rango de pH obtenido es desde 4.5 a 7, al cual es mejor trabajar con la proteína.

Como proyecciones futuras están la construcción y caracterización de tres electrodos: uno con Hb I sin purificar por FPLC, otro con Hb I más concentrada y todos los electrodos añadiendo Na₂S. También cambiar la estructura de la hemoglobina con diferentes aminoácidos y por último construir el sensor.

• Usando una escala de 1-5 indique el progreso que ha logrado con relación a las metas que estableció en su blog del 25 de agosto.

•       1 – ningún progreso, no he logrado ninguno de los objetivos propuestos.

•       2 – algo de progreso, he logrado al menos 10% de los objetivos propuestos.

•       3 – progreso intermedio, he logrado al menos 50% de los objetivos propuestos.

•       4 – mucho progreso, he logrado al menos 80% de los objetivos.

•       5 – excelente progreso, he logrado todos los objetivos para esta fecha.

Haciendo uso de esta escala he llegado a la máxima puntuación ya que hemos logrado completar los objetivos para este semestre de investigación. Hemos logrado obtener una proteína recombinada por medio de cultivos bacterianos a gran escala, realizándose éstos en un biorreactor, utilice diferentes técnicas de extracción y purificación para obtener hemoproteínas y por último, y lo más deseado, preparamos electrodos modificados con la proteína purificada para evaluar su comportamiento electroquímico.

• Resuma en base a los resultados de su investigación, la contribución científica de su proyecto.

Nuestra contribución científica será para mejorar los instrumentos que existen para medir la concentración de sulfuro de hidrógeno. Esto así ayuda en los campos de la salud, ambiente y más. De esto abundaré en una próxima entrada para en la que hablaré sobre esto y mis resultados.